Entwicklung eines rekombinanten UL30-Proteins des Enten-Enteritis-Virus

Die virale Enteritis der Ente, verursacht durch das Enten-Enteritis-Virus (DEV), ist eine akute, ansteckende und tödliche Erkrankung. Das DEV wird derzeit der Unterfamilie der Alphaherpesvirinae innerhalb der Familie der Herpesviridae zugeordnet. Die DNA-Polymerase, ein Produkt von UL30, ist für die erfolgreiche Virusreplikation in der Gruppe der Alphaherpesvirinae von zentraler Bedeutung. Das virale Enzym ist an den auslösenden Ereignissen der Genamplifikationsprozesse beteiligt. Das UL30-Protein ist auf Ebene der Aminosäuresequenz unter Herpesviren hochkonserviert. Es ist eines der wichtigsten Proteine für die Virusreplikation in der Wirtszelle. Die für UL30 kodierenden DNA-Sequenzen wurden aus der genomischen DNA des DEV identifiziert. In dieser Arbeit haben wir ein rekombinantes UL30-Protein des DEV aus einem prokaryotischen System entwickelt. Das exprimierte rekombinante Protein, das als Fusionsprotein mit Histidin-Tag erhalten wurde, wurde mittels Affinitätschromatographie gereinigt. Das gereinigte rekombinante Protein wurde durch SDS-PAGE und Western-Blot-Analyse unter Verwendung von Anti-DEV-Seren bestätigt, wobei im Blot eine 80-kDa-Proteinbande nachgewiesen wurde. Das rekombinante Protein wurde anschließend unter Verwendung von Amicon-Filtern dialysiert und konzentriert, wobei die Gesamtausbeute des Proteins 120 µg/ml betrug.