L'édition du génome avec le système CRISPR Cas9

L'ingénierie des génomes est à l'aube de son âge d'or. De nouveaux outils passionnants apparaissent et s'ajoutent à son arsenal. Après les TALEN et les Zing-finger, un nouvel outil digne d'intérêt vient s'ajouter. Il s'agit du système CRISPR. Ce système a été découvert pour la première fois chez le Streptococcus thermophilus et son rôle naturel est l'immunité adaptative spécifique à la séquence contre l'ADN étranger dans les bactéries. Dans le présent rapport, le système CRISPR Cas9, de type II, est utilisé pour tenter d'éliminer le gène HPRT1 exprimé dans les lymphocytes, à titre de preuve de concept. Le milieu HAT combiné à la thioguanine est utilisé comme milieu de sélection, ce qui permet une méthode de criblage rapide et simple. Pour vérifier que l'édition a bien eu lieu dans les cellules de mammifères, un kit de détection du clivage de l'ADN est utilisé en combinaison avec un test enzymatique.